EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans 細(xi)胞轉染試劑（高效）

產品描述

EZ Trans細(xi)胞(bao)(bao)轉染試劑(ji)作(zuo)為新(xin)一代的轉染試劑(ji)，其轉染原(yuan)理是(shi)帶(dai)(dai)(dai)正電的陽(yang)離(li)子聚合(he)物(wu)與(yu)核酸(suan)中帶(dai)(dai)(dai)負(fu)電的磷酸(suan)基(ji)團形成帶(dai)(dai)(dai)正電的復合(he)物(wu)后與(yu)細(xi)胞(bao)(bao)表面帶(dai)(dai)(dai)負(fu)電的蛋白多糖(tang)相(xiang)互作(zuo)用，并通過(guo)胞(bao)(bao)吞作(zuo)用進入細(xi)胞(bao)(bao)。

經過(guo)李(li)記生物的優化處理(li)，本產品具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適(shi)用范圍(wei)廣(guang)等(deng)特點(dian)。

　　EZ Trans細胞轉染試劑與Thermo/ Lipo 2000/Invotrigen/ Lipofectamine 2000等產品相比，操作更便捷，詳見使用方法。

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保存方法(fa)

冰袋運輸，4℃保(bao)存，保(bao)質期12個月。不(bu)可冷凍！

使用方法(fa)（以(yi) 24 孔(kong)板為例，其他培養皿中轉染請參考表1）

1. 接(jie)種細胞

對(dui)于(yu)貼壁細(xi)胞，轉染前18-24 h進行鋪(pu)板(ban)（不(bu)含抗生素），使(shi)其在轉染(ran)時(shi)的密度大約(yue)在80%左右。對于懸浮細(xi)胞，轉染(ran)當天，配制(zhi)EZ Trans-DNA復合(he)物(wu)之前進行鋪板，每(mei)500 µL生長培(pei)養基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培(pei)養液(ye)中的(de)血(xue)清不(bu)影(ying)響轉染效率。轉染試劑(ji)使用量(liang)受細胞類(lei)型及其(qi)他實驗(yan)條件(jian)影(ying)響，建議初(chu)次使用時設置(zhi)梯度進行優化合適的(de)使用量(liang)。

2. 準備EZ Trans-DNA復(fu)合(he)物

⑴對于每孔細(xi)胞，將1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血清(qing)的高糖DMEM培養基(ji)（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養基(ji)），混(hun)勻。

⑵對于每孔細(xi)胞，將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血(xue)清的高糖DMEM培(pei)養(yang)(yang)基(ji)（或(huo)者OPTI-MEM Ⅰ 培(pei)養(yang)(yang)基(ji)），輕輕混勻(yun)。

【注】：無(wu)血(xue)(xue)清的高糖DMEM培(pei)養基(ji)(ji)是稀釋(shi)液，不(bu)能使用含血(xue)(xue)清的培(pei)養基(ji)(ji)進行DNA和EZ Trans轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)的稀釋(shi)。因為EZ Trans-DNA轉(zhuan)染(ran)復合(he)物(wu)的形成過程不(bu)能含有(you)血(xue)(xue)清。

（3）將稀釋好的(de)EZ Trans轉染試劑盡快(kuai)全部(bu)加入(ru)到(dao)已(yi)稀釋(shi)好的質粒(li)DNA中，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻。

【注】：此(ci)混合的順序(xu)不能反(fan)向進行。

（4）室溫放置10-15 min，以形(xing)成EZ Trans-DNA復合(he)物。

3. 轉(zhuan)染細胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均(jun)勻(yun)滴入到含細胞的培(pei)養皿中。輕(qing)輕(qing)晃動(dong)培(pei)養皿或輕(qing)微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物分散均(jun)勻(yun)。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yang)箱培養(yang)6-18 h，去除含(han)EZ Trans-DNA復合物的培養(yang)液(ye)，更(geng)換新的培養(yang)液(ye)，繼續培養(yang)至對轉入(ru)基(ji)因表達分析。

【注】：篩選穩(wen)定轉染細胞(bao)株，轉染細胞(bao)24 h后，將(jiang)細胞(bao)傳(chuan)代至新(xin)鮮(xian)的生長培養(yang)基中(zhong)（將(jiang)細胞(bao)稀(xi)釋10倍以上），在37℃，5% CO₂培養箱中孵育24 h，加入篩(shai)選培養基。在有轉染抗性(xing)基因相匹配(pei)的藥(yao)物篩(shai)選條件下，約 1～2周(zhou)可篩(shai)選到耐藥(yao)性(xing)克(ke)隆，在這(zhe)期間(jian)需經(jing)常更換(huan)含篩(shai)選藥(yao)物的生長培養基。

注意事項(xiang)

1. 質(zhi)粒(li)質(zhi)量：請務必使用高純度無內毒素轉染級(ji)質粒。通過(guo)260 nm光吸(xi)收(shou)測定DNA 濃(nong)度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應(ying)該在(zai)1.8～2.0的范圍之內）。如有可(ke)能，請通過瓊(qiong)脂(zhi)糖凝膠(jiao)電泳檢(jian)測質(zhi)粒(li)的完整性。

2. 細(xi)胞條件：使用適當保存和經常傳(chuan)(chuan)代的(de)(de)健康細(xi)胞(bao)(bao)。確保細(xi)胞(bao)(bao)沒有被細(xi)菌(jun)、真菌(jun)或支原體污染(ran)。如果細(xi)胞(bao)(bao)是近期復(fu)蘇的(de)(de)液氮凍存細(xi)胞(bao)(bao)，請在轉染(ran)前至(zhi)少傳(chuan)(chuan)代兩次。建議(yi)使用GIBCO或者(zhe)李記生(sheng)物的(de)(de)胎(tai)牛血清培養細(xi)胞(bao)(bao)。

3. 細胞培養液要求(qiu)： EZ Trans細胞轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)劑可用于有血清(qing)培(pei)養(yang)基的轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)，并且(qie)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)前不需要(yao)換培(pei)養(yang)基。但是(shi)，制備轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)復(fu)合物(wu)時(shi)要(yao)求(qiu)用無血清(qing)培(pei)養(yang)基稀(xi)釋DNA和(he)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)劑，因(yin)為血清(qing)會影響(xiang)復(fu)合物(wu)的形成。確保細胞培(pei)養(yang)液沒(mei)有被細菌、真菌或支原體污染(ran)(ran)(ran)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時(shi)培(pei)養(yang)液中不添(tian)加抗生(sheng)素(su)。

4. DNA濃度(du)和EZ Trans細胞(bao)轉染試(shi)劑量的優化：DNA濃(nong)(nong)度(du)和轉染試劑使用(yong)量受細胞類型及其他實(shi)驗(yan)條件影響，初次使用(yong)應優(you)化DNA濃(nong)(nong)度(du)和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用(yong)者可嘗試每 1 μg DNA使用(yong) 1～4 μL體積EZ Trans細胞轉染試(shi)劑進行優化。DNA和轉染試(shi)劑的比例，通(tong)常推薦是1:2~1:5。

表1：不(bu)同培養體積對(dui)應的待轉DNA、EZ Trans、稀釋液用量(liang)

【注(zhu)】：該表使(shi)用(yong)量(liang)僅(jin)供(gong)參考，具體使(shi)用(yong)量(liang)還需根據細胞類型(xing)及其他實驗條件進行優化。使(shi)用時DNA（μg）: EZ Trans細胞轉(zhuan)染試(shi)劑（μL）比值(zhi)保持在1:2~1:5。

相關試劑推薦(jian)

活性檢(jian)測CCK-8細胞(bao)增(zeng)殖與毒性檢(jian)測試劑(ji)盒（貨號(hao)：AC11L053）