EZ Trans細胞(bao)轉染(ran)試劑(ji)與EZ 慢病毒系列/病毒轉染細胞試劑

轉染試(shi)劑產品描述(shu)

EZ Trans細胞轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑作為新一代(dai)的(de)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試劑，其轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)原理是帶正電的(de)陽離子(zi)聚(ju)合物與(yu)核酸中帶負(fu)(fu)電(dian)的磷酸基團形成帶正(zheng)電(dian)的復合物后與細(xi)胞(bao)表面帶負(fu)(fu)電(dian)的蛋(dan)白(bai)多糖相互作用，并通過胞(bao)吞(tun)作用進(jin)入細(xi)胞(bao)。

本產品(pin)經過李(li)記(ji)生物(wu)的優(you)化處理(li)，具(ju)有轉染效(xiao)率高，細胞(bao)毒性低，操作簡單，重復性好(hao)，適(shi)用范(fan)圍廣等特點。

以下為高效轉染試劑說明書，其他產品/病毒轉染細胞試劑詳情請問銷售人員。

細胞轉染試劑與(yu)慢病毒訂購信息

轉染試劑運(yun)輸與保存

藍冰運輸。4℃保存，有(you)效期(qi)12個月。【注】：不可(ke)冷凍！

高效轉染試劑(ji)使用方法（以 24 孔板為例，其(qi)他培養皿中轉(zhuan)染(ran)請參(can)考表1）

1. 接種細胞

對(dui)于貼壁細胞(bao)，轉染前(qian)18-24 h進行鋪板（不(bu)含(han)抗生素），使其(qi)在(zai)轉染(ran)時的密度大約在(zai)80%左右。對于(yu)懸浮細胞，轉(zhuan)染當天，配(pei)制(zhi)EZ Trans-DNA復合物(wu)之前(qian)進(jin)行鋪板，每500 µL生長培養(yang)基中加(jia)入(ru)4~8×10⁵cells。  

【注】：培養液中的血清不影響轉(zhuan)染效率。轉(zhuan)染試劑使(shi)用(yong)(yong)量(liang)受細胞類型及(ji)其他實驗條件影響，建(jian)議初次使(shi)用(yong)(yong)時(shi)設(she)置梯(ti)度進(jin)行優化最佳使(shi)用(yong)(yong)量(liang)。

2. 準備(bei)EZ Trans-DNA復合(he)物(wu)

（1）對于(yu)每(mei)孔細(xi)胞，將(jiang)1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血(xue)清的高糖DMEM培(pei)養(yang)基（或者(zhe)OPTI-MEM Ⅰ 培養基），混勻(yun)。

（2）對于(yu)每孔(kong)細胞，將(jiang)3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋(shi)到40 μL無血清的高(gao)糖DMEM培養基(ji)（或者(zhe)OPTI-MEM Ⅰ 培養基(ji)），輕輕混勻。

【注】：無血清(qing)的高糖DMEM培(pei)養基是(shi)稀(xi)釋液，不能(neng)使用含血清的培(pei)養基進(jin)行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀(xi)釋。因(yin)為EZ Trans-DNA轉(zhuan)染復合物的(de)形成(cheng)過(guo)程不能(neng)含有(you)血清(qing)。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部(bu)加入到已稀釋好(hao)的質粒(li)DNA中，輕輕混(hun)勻。

【注】：此混合的順序不能反向(xiang)進行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合物。

3. 轉染細胞(bao)

（1）將上(shang)述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuan)染復合(he)物(wu)均(jun)勻(yun)滴入到含細胞(bao)的培(pei)養皿中。輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)培(pei)養皿或輕(qing)微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合(he)物(wu)分散均(jun)勻(yun)。

（2）在(zai)37℃，5% CO₂培養箱培養6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復合物的(de)培養液，更換新的(de)培養液，繼續培養至對轉入基因表達分(fen)析。

【注】：篩選(xuan)穩定(ding)轉染細胞(bao)株，轉染細胞(bao)24 h后，將(jiang)細(xi)胞傳代(dai)至新鮮的(de)生長培(pei)養基(ji)中（將(jiang)細(xi)胞稀釋10倍(bei)以上），在37℃，5% CO2培養箱(xiang)中(zhong)孵育(yu)24 h，加入篩(shai)選(xuan)培養基。在有轉染抗性(xing)基因相(xiang)匹配的藥物篩(shai)選(xuan)條件下，約 1～2周可(ke)篩(shai)選(xuan)到耐藥性(xing)克隆，在這期間需經常更換含篩(shai)選(xuan)藥物的生長培養基。

注意(yi)事(shi)項

1. 本產品僅限于(yu)科學實驗研(yan)究使用，不(bu)得(de)用于(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷、治療等領(ling)域。

2. 質(zhi)粒(li)質(zhi)量：請務必使用高純度無內(nei)毒素(su)轉染級質粒。通(tong)過260 nm光吸(xi)收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定(ding) DNA 純度(du)（比值應(ying)該在1.8～2.0的范圍(wei)之內）。如有可能，請通(tong)過瓊脂(zhi)糖(tang)凝(ning)膠電泳檢(jian)測質(zhi)粒的完(wan)整性。

3. 細胞條件：使用適當保存和經(jing)常(chang)傳(chuan)代(dai)的(de)健(jian)康細(xi)(xi)胞。確保細(xi)(xi)胞沒有(you)被細(xi)(xi)菌、真菌或支(zhi)原體污染。如果細(xi)(xi)胞是近期復蘇的(de)液氮凍存細(xi)(xi)胞，請在轉染前至(zhi)少(shao)傳(chuan)代(dai)兩次。建議使用胎牛血(xue)清（貨號：AC03L055）培養細胞。

4. 細胞培養(yang)液要求(qiu)：EZ Trans細胞(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試劑可用(yong)于有(you)血(xue)清(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)，并且(qie)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)前(qian)不需要換(huan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基。但是，制備轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)復(fu)合物時要求用(yong)無血(xue)清(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基稀釋DNA和(he)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試劑，因為血(xue)清(qing)會(hui)影響復(fu)合物的(de)形成。確保細胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)液沒有(you)被細菌(jun)、真菌(jun)或支原體污染(ran)(ran)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)時培(pei)(pei)養(yang)(yang)液中不添(tian)加(jia)抗生素。

5. DNA濃度和EZ Trans細(xi)胞轉染試劑量(liang)的(de)優化：DNA濃度和轉染試劑使用(yong)量受細(xi)胞(bao)類(lei)型(xing)及其他實驗(yan)條件影響，初次使用(yong)應優化DNA濃度和轉染試劑量以得到(dao)最大的(de)轉染效率(lv)。使(shi)用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體積EZ Trans細胞轉(zhuan)染試劑進行優化。DNA和(he)轉(zhuan)染試劑的(de)比例，通常推薦是1:2~1:5。

   表1：不同(tong)培(pei)養(yang)體積對(dui)應的待轉DNA、EZ Trans、稀(xi)釋液(ye)用量

【注】：該表使(shi)用量僅供參考，具體使(shi)用量還需(xu)根(gen)據(ju)細胞(bao)類型及其(qi)他實(shi)驗條件進行優化(hua)。使(shi)用時DNA（μg）: EZ Trans細(xi)胞(bao)轉染試劑（μL）比值(zhi)保(bao)持在1:2~1:5。

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